• Les tests moléculaires

Ces méthodes sont fréquemment utilisées dans le diagnostic bactériologique. La plupart des méthodes de diagnostic mises au point sont basées sur l’amplification génique.

Le diagnostic des maladies causées par des viroïdes ne peut être assurée par les méthodes sérologiques. On utilise dans ce cas des techniques basées sur l'analyse des acides nucléiques de plantes infectées par électrophorèse en gel de polyacrylamide, ou sur la caractérisation d'acides nucléiques par hybridation moléculaire.

Le recours à l'amplification moléculaire, via la PCR, a permis de reculer les limites de sensibilité des techniques de diagnostic basées sur la détection de séquences spécifiques d'acides nucléiques.

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  • L'hybridation
  • Méthode basée sur le principe de la formation d’ADN double brin (duplex) entre une molécule d’ADN cible du pathogène fixé sur un support et un brin d’acide nucléique complémentaire qui lui est marqué ( sonde) et dont on va révéler le signal.

  • Electrophorèse en gel de polyacrylamide
  • Etant donné la nature et les propriétés pathologiques des viroïdes, le diagnostic des maladies qu'ils induisent ne peut être assuré par les méthodes sérologiques en raison de l'absence de protéines de structure et de propriétés antigéniques. De plus les tests biologiques relatifs aux viroïdes demandent beaucoup de temps et ne sont reproductibles que dans des conditions d'environnement très strictes des plantes-tests.

  • La réaction de polymérisation en chaîne (PCR)
  • La réaction de polymérisation en chaîne (ou en anglais, la polymerase chain reaction), est une méthode de biologie moléculaire mise au point en 1985 par Kary Mullis, qui obtint le prix Nobel en 1993. Cette méthode permet de dupliquer un fragment d'ADN, et par répétition du processus, d'atteindre des milliards de copies : 2 N au bout de N cycles.